細(xì)胞TRANSWELL實(shí)驗(yàn)

簡(jiǎn)要描述：細(xì)胞TRANSWELL實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)步驟：配制結(jié)晶紫染液 transwell侵襲孔的制備細(xì)胞離心下室加培養(yǎng)基上室接種細(xì)胞染色。

更新時(shí)間：2022-12-23
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實(shí)驗(yàn)

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詳細(xì)介紹

Transwell細(xì)胞侵襲作為一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，其主要材料是transwell小室，其外形為一個(gè)可放置在孔板里的小杯子，杯子底層有一張具有通透性的膜，這層膜帶有微孔,孔徑大小從01-12um不等。根據(jù)不同需要有不同材料，般常用的是聚碳酸酯膜。將transwell小室放入培養(yǎng)板中，小室內(nèi)稱為上室，培養(yǎng)板內(nèi)稱為下室。上室裝上層培養(yǎng)液，下室內(nèi)裝下層培養(yǎng)液，二者以transwel小室底部的聚碳酸酯膜相隔。細(xì)胞種在上室可以研究下層培養(yǎng)液中的成分對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、運(yùn)動(dòng)等的影響。運(yùn)用不同孔徑和經(jīng)過不同處理的聚碳酸酯膜，可以進(jìn)行細(xì)胞共培養(yǎng)、細(xì)胞趨化、細(xì)胞遷移細(xì)胞侵襲等各種研究。

Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)
常用8.0、12.0um孔徑的膜，原理與transwell遷移實(shí)驗(yàn)類似。上室種細(xì)胞(一般為腫瘤細(xì)胞)，下室加入FBS或者某些特定的趨化因子，腫瘤細(xì)胞會(huì)向營(yíng)養(yǎng)成分高的下室運(yùn)動(dòng)。但是與遷移實(shí)驗(yàn)不同的是，本實(shí)驗(yàn)中聚碳酸酯膜上室側(cè)鋪有層基質(zhì)膠，用以模擬體內(nèi)細(xì)胞外墓質(zhì) 細(xì)胞要想穿過透性膜進(jìn)入下室，需要先分泌基質(zhì)金屬蛋白酶( MMPS )將基質(zhì)膠降解，方能通過聚碳酸酯膜。對(duì)進(jìn)入下室的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)即可反應(yīng)細(xì)胞的侵襲能力。

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