上海實(shí)驗(yàn)-細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)

簡(jiǎn)要描述：上海實(shí)驗(yàn)服務(wù)-細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)是上海達(dá)為科生物的基礎(chǔ)服務(wù)項(xiàng)目之一，由細(xì)胞平臺(tái)經(jīng)驗(yàn)豐富的實(shí)驗(yàn)人員操作完成。

更新時(shí)間：2022-12-23
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實(shí)驗(yàn)

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　　上海實(shí)驗(yàn)細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)是上海達(dá)為科生物的基礎(chǔ)服務(wù)項(xiàng)目之一，由細(xì)胞平臺(tái)經(jīng)驗(yàn)豐富的實(shí)驗(yàn)人員操作完成。

　　(1)收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞:棄除舊培養(yǎng)基，用PBS洗滌細(xì)胞加入適量胰酶進(jìn)行消化。加入新鮮的培養(yǎng)基吹打細(xì)胞，并將細(xì)胞收集于標(biāo)記好的對(duì)應(yīng)離心管中，室溫1000 rpm離心5 min棄除.上清液。

　　(2)洗滌細(xì)胞:用預(yù)冷的PBS重懸上述細(xì)胞沉淀，室溫1000 rpm離心5 min將上清液棄除。

　　(3)固定細(xì)胞:將細(xì)胞用0.5 ml預(yù)冷的PBS溶液重懸，加入預(yù)冷的70%乙醇溶液在4°C固定過夜。

　　(4) PI染色細(xì)胞:加入10μl RNase ( 10mg/ml) ，置37 C、5% CO2、飽和濕度恒溫培養(yǎng)箱孵育30min,運(yùn)用冰浴終止RNase A酶作用;再加入10μ1溴化乙錠(PI， 1mg/ml) 染色，置37 C、5% CO2、飽和濕度恒溫培養(yǎng)箱孵育30min.

　　(5)流式細(xì)胞儀檢測(cè)，分析PI熒光的直方圖。

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