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簡(jiǎn)要描述:elisa實(shí)驗(yàn):您只需將需要檢測(cè)的動(dòng)物(Human,Rat,Mouse,Rabbit,Pig,Monkey……)種類和檢測(cè)指標(biāo)(介素類、因子類)及標(biāo)本數(shù)量(48T/96T)告知我司業(yè)務(wù)人員即可。
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elisa實(shí)驗(yàn):達(dá)為科生物提供的檢測(cè)用所有試劑,適合檢測(cè)包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本,靈敏度*。
注意事項(xiàng):在收集標(biāo)本前都有一個(gè)完整的計(jì)劃,清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。我們提倡新鮮標(biāo)本盡早檢測(cè),對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本,及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?,如有特殊原因需要周期收集?biāo)本,請(qǐng)?jiān)炷H〔暮螅瑢?biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在溫差,蛋白極易降解,直接影響實(shí)驗(yàn)質(zhì)量,所以避免反復(fù)凍融。代測(cè)放免標(biāo)本的客戶取材前須向我司銷售人員索要說(shuō)明書,具體操作注意事項(xiàng)請(qǐng)與我司技術(shù)人員溝通。
液體類標(biāo)本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
尿液:用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
elisa實(shí)驗(yàn)步驟:
1.包被抗原:稀釋液pH 9.6 碳酸鹽緩沖液,多肽濃度2ug/ml,0.1ml/孔,4ºC過(guò)夜,洗凈。
2.1%BSA (pH 9.6 碳酸鹽緩沖液) 封閉,0.1ml/孔,37ºC1h,洗凈。
3.稀釋抗血清(可稀釋不同濃度) 0.1ml/孔,37ºC 30分鐘,洗凈。
4.稀釋辣根過(guò)氧化物每標(biāo)記的二抗0.1ml/孔,37ºC 40分鐘,洗凈。
5.顯色:TMB顯色
A液:四甲基聯(lián)苯胺10mg 溶于DMF1ml中,再用pH5.0檸檬酸緩沖液稀釋100倍.
B液:5ul雙氧水加蒸餾水12.5ml 。終止液:2N硫酸
A液、B液各一滴,比光顯色10分鐘,終止液一滴。
6.450nm 波長(zhǎng)測(cè)OD值
目前,公司主營(yíng)實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)、動(dòng)物模型構(gòu)建、細(xì)胞株等。
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