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簡(jiǎn)要描述:茜素紅染色原理:茜素紅與鈣發(fā)生顯色反應(yīng),產(chǎn)生一種深紅色的帶色化合物,這樣成骨誘導(dǎo)的細(xì)胞外面沉積的鈣結(jié)節(jié)也就被染成了深紅色。
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通過(guò)茜素紅染色檢測(cè)細(xì)胞成骨分化
實(shí)驗(yàn)原理
1、成骨誘導(dǎo)的過(guò)程是使鈣離子能夠以鈣鹽的方式沉淀下來(lái),“鈣結(jié)節(jié)”,鑒定鈣結(jié)節(jié)的染色方法常用茜素紅染色法。
2、茜素紅:茜素磺酸鈉,茜素S,茜素紅S,茜素胭脂紅,1,2-二羥基蒽醌-3-磺酸鈉,1,2-二羥基蒽醌3-磺酸鈉鹽。橙黃色或黃棕色粉末。易溶于水,微溶于乙醇,不溶于苯。1%水溶液pH為2.15,其水溶液呈前黃褐色,加鹽酸后變?yōu)辄S色,加氫氧化鈉后則變成藍(lán)紫色。有刺激性。能與許多金屬離子生成有色化合物,能與鋯、釷、鋁、鈦及鈣發(fā)生顯色反應(yīng)。
茜素紅染色實(shí)驗(yàn)步驟:
1、石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯I20分鐘,二甲苯Ⅱ20分鐘,無(wú)水乙醇I5分鐘,無(wú)水乙醇Ⅱ5分鐘,75%酒精5分鐘,自來(lái)水洗。
2、茜素紅染色:切片用茜素紅染液染5-10分鐘,自來(lái)水洗,將切片放置烤箱內(nèi)烤干。
3、透明封片:切片入干凈的二甲苯透明5分鐘,中性樹(shù)膠封片。
4、顯微鏡鏡檢,圖像采集分析。
結(jié)果判讀:鈣鹽沉積出呈深紅色,背景淡紅色或者近無(wú)色。
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